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質(zhì)量光度計(jì)的比色過程要注意些什么？
點(diǎn)擊次數(shù)：59 更新時(shí)間：2025-11-21
質(zhì)量光度計(jì)常被用于實(shí)驗(yàn)室，它體積不大，卻能在3分鐘內(nèi)告訴你樣品里蛋白質(zhì)、糖或重金屬的精確濃度。可同一臺(tái)儀器，有人測(cè)得數(shù)據(jù)漂亮，有人卻連標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)都拉不直，問題多半出在“比色”這一步。比色不是“倒進(jìn)去、按一下”那么簡(jiǎn)單，而是一場(chǎng)從器皿到溫度、從時(shí)間到心態(tài)的“全程控”。
1.“干凈”是比色的生命線
比色皿若有劃痕或指紋，會(huì)在光路里形成散射點(diǎn)，吸光度瞬間虛高0.02 A；重金屬檢測(cè)時(shí)，這0.02 A可能把結(jié)果從“合格”推向“超標(biāo)”。正確流程是新皿先用1+1硝酸泡30 min，再用純水沖3遍；每次測(cè)試結(jié)束，立即用擦鏡紙單向輕拭，絕不可來回蹭。
2.波長(zhǎng)選錯(cuò)，努力白費(fèi)
質(zhì)量光度計(jì)的燈源是氙閃燈，能量在230 nm和260 nm處出現(xiàn)雙峰。若用280 nm測(cè)蛋白，卻把帶寬設(shè)成5 nm，燈能量驟降60%，信噪比差，結(jié)果漂移。正確做法是先掃全譜找λmax，再把帶寬縮到1 nm；如果λmax落在220 nm以下，果斷換用石英皿，普通玻璃在240 nm的透過率已低于50%，相當(dāng)于給光路加了“墨鏡”。
3.時(shí)間溫度，一個(gè)都不能放過
顯色反應(yīng)多是酶或氧化還原體系，對(duì)溫度“敏感”。總酚測(cè)定在25℃時(shí)30 min顯色完成，若實(shí)驗(yàn)室空調(diào)壞了，溫度升到30℃，反應(yīng)20 min就達(dá)到峰值，繼續(xù)放置吸光度反而下降，曲線“掉頭”。提前把試劑和樣品在同一水浴恒溫10 min，計(jì)時(shí)從加入最后一滴顯色劑開始，才能確保每管經(jīng)歷“同一生化時(shí)鐘”。
4.加樣順序，差1秒也“翻車”
磷酸鹽測(cè)定的鉬藍(lán)法，需要先加鉬酸銨，再還原劑。若先加還原劑，溶液里的抗壞血酸會(huì)把游離鉬酸還原成雜多藍(lán)，背景值飆升0.05 A。用排槍批量加樣時(shí)，最好“縱向”操作，先給所有管加A液，再統(tǒng)一加B液，避免橫向順序帶來的時(shí)間梯度。
5.讀數(shù)窗口，錯(cuò)過就是“過期”
鉻與二苯碳酰二肼的紫紅色絡(luò)合物在5 min內(nèi)穩(wěn)定，第6分鐘開始褪色2%/min。把比色皿放進(jìn)槽位后，別急著按“開始”，先“預(yù)讀”3次，待數(shù)值漂移＜0.001 A/min再正式讀數(shù)；若30 s內(nèi)仍漂移，說明溫度未平衡，繼續(xù)等待比“硬測(cè)”更省時(shí)間。
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