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梯度PCR儀操作時(shí)對(duì)不同模式建立的研究
點(diǎn)擊次數(shù)：1986 更新時(shí)間：2022-07-13
梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。PCR反應(yīng)能否成功，退火溫度是關(guān)鍵，梯度PCR儀每個(gè)孔的溫度可以在一定范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出適宜的反應(yīng)條件。一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱(chēng)之為梯度PCR儀。
梯度PCR儀在一般操作時(shí)先打開(kāi)PCR儀的熱蓋，插入0.2ml的樣品管。蓋好熱蓋。再打開(kāi)PCR儀的電源，儀器程序開(kāi)始初始化，需等待幾分鐘。
如何為梯度PCR儀建立梯度模式？
1.點(diǎn)中一個(gè)步驟，再點(diǎn)“Option”鍵；
2.點(diǎn)“VeriFlex step”，出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口，輸入6個(gè)梯度溫度，溫度下方的“1－2”是指對(duì)應(yīng)的1、2兩行加熱孔，全部輸好后，點(diǎn)“Done”確定。注意相鄰的兩個(gè)梯度溫度之差大不能超過(guò)5℃。
梯度PCR儀漸變模式的建立：
1.點(diǎn)中一個(gè)步驟，再點(diǎn)“Option”鍵；
2.點(diǎn)“Auto Delta”，出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口。點(diǎn)“Staring Cycle”，輸入起始循環(huán)數(shù)；點(diǎn)“Delta Temperature”，輸入溫度變化值；點(diǎn)“Delta Time”，輸入時(shí)間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR，可以提高PCR反應(yīng)的特異性。例如輸入起始循環(huán)數(shù)為2，溫度變化值為＋0.5℃，時(shí)間變化值為＋5s，則表示從第2個(gè)循環(huán)開(kāi)始，每循環(huán)一次升溫0.5℃，時(shí)間增加5s。
